植物叶绿素测定仪的实验步骤

　　植物叶绿素测定仪是用来测量叶绿素含量的仪器，可以即时测量植物的叶绿素相对含量（单位SPAD）或“绿色程度"从而可以了解植物真实的硝基需求量并且帮助您了解土壤硝基的缺乏程度或是否过多地施加了氮肥。您可以通过这种仪器来增加氮肥的利用率，并可保护环境。下面为大家介绍下植物叶绿素测定仪的实验步骤：

　　1.取新鲜植物叶片（或其它绿色组织）或干材料，擦净组织表面污物，剪碎（去掉中脉），混匀。

　　2.称取剪碎的新鲜样品0.2g，共3份，分别放入研钵中，加少量石英砂和碳酸钙粉及2～3ml95%乙醇，研成均浆，再加乙醇10ml，继续研磨至组织变白。静置3～5min。

　　3.取滤纸1张，置漏斗中，用乙醇湿润，沿玻棒把提取液倒入漏斗中，过滤到25ml棕色容量瓶中，用少量乙醇冲洗研钵、研棒及残渣数次，然后连同残渣一起倒入漏斗中。

　　4.用滴管吸取乙醇，将滤纸上的叶绿体色素全部洗入容量瓶中。直至滤纸和残渣中无绿色为止。然后用乙醇定容至25ml，摇匀。

　　5.把叶绿体色素提取液倒入光径1cm的比色杯内。以95%乙醇为空白，在波长665nm、649nm下测定吸光度。

　　实验结果计算：将测定得到的吸光值代入下面的式子：Ca=13.95A665－6.88A649；Cb=24.96A649－7.32A665。据此即可得到叶绿素a和叶绿素b的浓度（Ca、Cb：mg/L），二者之和为总叶绿素的浓度。然后根据下式可进一步求出植物组织中叶绿素的含量：

　　叶绿素的含量（mg/g）=[叶绿素的浓度×提取液体积×稀释倍数]/样品鲜重（或干重）。